La iglesia de Santa Ana es un pequeño edificio cerrado situado en la zona suburbana de Spello, a pocos pasos de la Villa de Mosaici. Lo más probable es que fuera un oratorio de la Fraternidad de los Disciplinados de Santa Ana, que dirigía el hospital dentro de las murallas desde 1362. No hay documentos sobre los cimientos, pero recientemente se han descubierto frescos que llevan a situar la fecha de construcción del edificio a principios del siglo XIII. Al igual que muchos edificios de Spello, ha sido objeto de reformas que han cambiado su aspecto original, incluida una reciente tras el terremoto de 1997.
La iglesia tiene una cubierta a dos aguas con un óculo central sin rosetón y también tiene un pórtico cubierto por una reja que se interpone entre el exterior y el interior de la iglesia, de planta cuadrangular, tiene tres altares y un muro de fondo recto. Las paredes están decoradas con frescos encargados por los lugareños entre los siglos XV y XVI. Entre ellas podemos mencionar una Virgen y un Niño con San Job con Santa Ana de la escuela de Umbría, un fresco de la escuela foliada dentro de un nicho, un estandarte procesional del siglo XIV y otros frescos del siglo XVI de la escuela de Umbría. Además, junto al altar se coloca una Virgen de Lourdes de yeso en una hornacina una estatua de Santa Ana con la Virgen infantil.